Xạ khuẩn nội sinh Streptomyces parvulus HNR3X4 trên cây bưởi Diễn Hà Nội và tiềm năng sinh tổng hợp chất kháng khuẩn

Nội dung text: Xạ khuẩn nội sinh Streptomyces parvulus HNR3X4 trên cây bưởi Diễn Hà Nội và tiềm năng sinh tổng hợp chất kháng khuẩn

1. Tp chí Khoa h c HQGHN: Khoa h c T nhiên và Công ngh , Tp 32, S 1S (2016) 327-333 X khu n n i sinh Streptomyces parvulus HNR3X4 trên cây b ưi Di n Hà N i và ti m n ng sinh t ng h p ch t kháng khu n Phan Th H ng Th o1,*, Nguy n V Mai Linh 1, Nguy n Th H ng Liên 1, Nguy n Ki u B ng Tâm 2, Nguy n V n Hi u1 1Vi n Công ngh sinh h c, Vi n Hàn lâm Khoa h c và Công ngh Vi t Nam (VAST), 18 Hoàng Qu c Vi t, C u Gi y, Hà N i, Vi t Nam 2Khoa Môi tr ng, Tr ng i h c Khoa h c T nhiên, HQGHN, 334 Nguy n Trãi, Hà N i, Vi t Nam Nh n ngày 28 tháng 5 n m 2016 Ch nh s a ngày 25 tháng 6 n m 2016; Ch p nh n ng ngày 06 tháng 9 n m 2016 Tóm t t: X khu n n i sinh t n t i trong mô th c v t có ti m n ng sinh t ng h p nhi u ho t ch t sinh h c quý, trong ó áng chú ý là các ch t kháng khu n, có ti m n ng ng d ng trong công tác bo v th c v t bng bi n pháp sinh h c, d n thay th hóa ch t b o v th c v t, gi m thi u nguy c ơ ô nhi m môi tr ưng và nâng cao ch t l ưng nông s n. Trong nghiên c u này, 45 ch ng x khu n ni sinh ưc phân l p t các cây b ưi Di n Hà N i ưc nghiên c u c im sinh h c và kh nng i kháng v i các ch ng vi sinh v t ki m nh. Trong s ó, ch ng HNR3X4 th hi n ho t tính sinh h c cao, kháng vi khu n Gram âm , Gram d ươ ng và m t s ch ng n m gây b nh G. candidum , F. oxysporum và F. udum ki m nh. X khu n HNR3X4 sinh tr ưng t t trên nhi u lo i môi tr ưng nuôi c y v i nhi t phát tri n t 15÷45 0C và pH 4÷9, sinh ra nhi u chu i bào t dài d ng xo n lò xo, v i s l ưng bào t trên m t chu i t 10-50 bào t có c u trúc b mt nh n. Da vào nghiên c u c im sinh h c và phân tích trình t gen 16S rDNA, ch ng HNR3X4 có t ươ ng ng cao 99% v i các ch ng Streptomyces parvulus , do ó ưc t tên là S. parvulus HNR3X4. Ch ng HNR3X4 sinh t ng h p ho t ch t kháng khu n cao nh t trên môi tr ưng Gause I, pH 7 và nhi t 37 o C. T khóa: X khu n n i sinh, phân lo i x khu n, 16S rDNA, Streptomyces parvulus, ch t kháng khu n. 1. M u∗∗∗ khu n n m gi v trí quan tr ng do s a d ng cao, kh n ng sinh t ng h p nhi u lo i enzym Vi sinh v t n i sinh là các vi sinh v t sinh và thu c kháng sinh dùng trong nông nghi p và sng các mô bên d ưi l p t bào bi u bì c a y h c. X khu n n i sinh c ư ng không nh ng cây mà không gây ra các tri u ch ng b nh cho không gây b nh cho cây ch mà còn có kh cây ch [1]. Trong s các loài vi sinh v t, x nng thúc y s phát tri n c a cây ch b ng con ưng ng hóa các ch t dinh d ưng nh ư ___ hòa tan phosphat, c nh nit ơ t do, hay sinh ∗ Tác gi liên h . T.: 84-916329586 tng h p các hooc-môn th c v t, cung c p các Email: pthongthao@ibt.ac.vn 327
2. 328 P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 lo i vitamin giúp cây t ng tr ưng t t h ơn [2]. Phân l p các ch ng x khu n n i sinh Ngoài ra, x khu n n i sinh còn có kh n ng Mu th c v t sau khi ưc x lý, làm s ch ki m soát b nh d ch cho cây ch d a trên m t và phân l p theo Shutsrirung và c ng s [8]. s c ơ ch nh ư i kháng (antibiosis) nh ư: sinh Các a phân l p ưc 28ºC trong 15÷60 ch t kháng sinh, sinh t ng h p các enzym phân ngày. Các m u x khu n ưc thu n khi t và hy thành t bào c a n m b nh, c nh tranh v gi trên môi tr ưng ISP2 và s d ng trong các dinh d ưng, n ơi c ư trú và kích thích tính ch ng nghiên c u ti p theo. ch u h th ng c a cây ch [3, 4]. G n ây ã có nhi u nghiên c u v kh n ng sinh t ng h p các Nghiên c u c im hình thái ch t th c p, có ho t tính sinh h c t các loài x Nghiên c u c im sinh h c theo ph ươ ng khu n n i sinh [5]. iu này cho th y x khu n pháp trong ISP (1974) và khóa phân lo i ni sinh th c s là nh ng ng c viên ti m Bergey [6,7]. Màu s c c a khu n ty c ơ ch t nng trong tìm ki m các ch t kháng sinh m i, (KTCC), khu n ty khí sinh (KTKS) và s c t nh m ki m soát d ch b nh cho cây theo h ưng tan ti t ra môi tr ưng ưc ánh giá theo thân thi n môi tr ưng và phát tri n các s n Shirling và Gottlieb (1966) trên b ng màu c a ph m thu c m i dùng cho ng ưi và ng v t. Tresner & Backus [9,10]. Hình d ng cu ng sinh Bài báo này s t p trung ch y u v các k t qu bào t và bào t ưc quan sát và ch p nh phân l p x khu n n i sinh trong cây B ưi Di n dưi kính hi n vi in t JSM-5000. – Hà N i, ng th i nh danh và nghiên c u Tách chi t DNA và phân tích trình t gene các c im sinh h c và kh n ng sinh t ng hp ho t ch t kháng khu n c a x khu n 16S rRNA HNR3X4. Ph ươ ng pháp tách chi t DNA ưc ti n hành theo Sambrook và Russell [11]. Gen mã hóa 16S rRNA c a ch ng x khu n ưc 2. Vt li u và ph ơ ng pháp nghiên c u khu ch i b ng ph n ng PCR t DNA t ng s b ng c p m i 27f (5'- 2.1. Vt li u và môi tr ng nuôi c y TAACACATGCAAGTCGAACG-3') và 1492R (5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’) và ti n - Các m u th c v t (r , cành) c a cây B ưi hành theo Shutsrirung và c ng s [8]. Trình Di n Hà N i. t nucleotide c a gen 16S rRNA ưc phân tích - Nm và vi khu n ki m nh: G. da trên d li u Ngân hàng gen c a NCBI. candidum VSV 5 , F. oxysporum FO5, F. tươ ng ng v trình t ưc xác nh và so udum VSV 2 và B. subtilis ATCC 6633 t b sánh v i các trình t khác ưc so sánh trên sưu t p gi ng c a phòng Vi sinh v t t. Vi nhân hàng GenBank b ng BLAST khu n ki m nh Staphylococcus aureus (www.ncbi.nlm.nih.gov ). M c t ươ ng ng ATCC 25922 và Pseudomonas aeruginosa di truy n c a các ch ng ưc xây d ng d a trên ATCC 10145 nh n t Vi n Ki m nghi m ph n m m CLC DNA workbench 6.6. thu c. Các on m i khu ch i gen 16S ánh giá kh n ng i kháng v i vi sinh v t rDNA do Invitrogen (H ng Kông) cung c p. ki m nh -Môi tr ưng nuôi c y và phân lo i: Các môi Các ch ng x khu n phân l p ưc ki m tra tr ưng theo ISP (International Streptomyces da trên kh n ng i kháng c a các ch ng này Project) [6 ] và khóa phân lo i Bergey [7] ưc vi m t s ch ng n m và vi khu n Gram (+) và s d ng nuôi c y và phân lo i x khu n. Môi Gram (-) ki m nh b ng ph ươ ng pháp th i tr ưng th ch khoai tây (PDA) ưc s d ng th ch và ph ươ ng pháp khu ch tán trên th ch. nuôi c y n m ki m nh. Kh n ng i kháng ưc ánh giá d a trên vòng c ch vi khu n và n m ki m nh [12]. 2.2. Ph ơ ng pháp nghiên c u
3. P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 329 3. Kt qu (chi m 26,67 %). c bi t trong s ó ch ng HNR3X4 (x khu n n i sinh tách t r ) th hi n 3.1. Phân l p x khu n n i sinh t cây b i kh n ng i kháng v i nhi u ch ng vi sinh v t Di n – Hà N i ki m nh c bi t v i vi khu n Gram (+) S. aureus ATCC 25922 và B. subtilis ATCC 6633 Trên t ng s 10 m u cành, r và lá c a 10 (Bng 1) . cây b ưi di n thu th p t i a bàn Hà N i ã phân l p ưc 45 ch ng x khu n, trong ó x 3.3. Nghiên c u c im sinh h c c a ch ng khu n n i sinh thu ưc các m u r có s x khu n HNR3X4 lưng khu n l c x khu n thu ưc (19 ch ng chi m 42,2%) nhi u h ơn và a d ng h ơn các Ch ng HNR3X4 thu c nhóm Vàng xám, mu cành (12 ch ng chi m 26,6 %) và m u lá sinh tr ưng t t trên h u h t các môi tr ưng ISP (14 ch ng chi m 31,1 %). Nghiên c u c im ki m tra (ISP1-8), không sinh s c t trên môi nuôi c y trên các môi tr ưng ISP t 1 ÷ 8, k t tr ưng ISP8 và không t o s c t melanin (B ng qu cho th y, s l ưng x khu n có màu vàng là 2). Ch ng HNR3X4 phát tri n trong d i nhi t chi m ch y u (57,78 %), ng th 2 là nhóm t 15 ÷ 45 oC và pH t 4 ÷ 10. Sinh tr ưng xám (31,1 %), nhóm nâu chi m 4,4 %, xanh tt nh t 28 oC và pH 7,0, ch u ưc n ng chi m 2,2 % và nhóm không xác nh (b m t mu i n 3% và có kh n ng phân h y khu n ty khí sinh không rõ) chi m 4,4%. Trong nhi u c ơ ch t nh ư: chitin, casein, tinh b t, s 45 ch ng x khu n phân l p ch có ch ng guaiacol, carboxymethyl cellulose và xylan vi HNR7X4 sinh s c t melanine. vòng phân h y l n l ưt là 15, 35, 11, 24, 31 và 38 mm. Ch ng NHR3X4 có kh n ng ng 3.2. Kh n ng i kháng c a x khu n phân l p hóa các ngu n carbon nh ư: D-glucose, L- arabinose, sucrose, D-manitol, xylose, Trong s 45 ch ng x khu n n i sinh phân fructose, raffinose, rhamnose và cellulose. lp có 12 ch ng th hi n kh n ng kháng ít nh t mt trong các ch ng vi sinh v t ki m nh Bng 1. Ho t tính kháng n m và kháng khu n c a x khu n n i sinh HNR3X4 Kích th ưc vòng i kháng (D, mm) Ch ng vi sinh v t ki m nh Cc th ch Dch chi t S. aureus ATCC 25922 26 ± 0,42 25 ± 1,00 B. subtilis ATCC 6633 25 ± 0,50 25 ± 0,42 P. aeruginosa ATCC 25932 7 ± 0,90 0 G. candidum VSV 5 15 ± 0,81 7 ± 0,35 F. oxysporum FO5 17 ± 0,50 10 ± 0,76 F. udum VSVD 2 14 ± 0,32 6 ± 0,58 Bng 2. M t s c im nuôi c y c a x khu n HNR3X4 Môi tr ưng Khu n ty khí sinh Khu n ty c ơ ch t Sc t Sinh tr ưng ISP1 Vàng x m ng vàng xám Vàng sáng - ++ ISP2 Vàng oliu Vàng nâu sáng vàng ++ ISP3 Xám oliu Xám oliu vàng ++ ISP4 Vàng ng nâu Vàng cam sáng vàng +++ ISP5 Vàng oliu ng xám nh t Vàng m vàng ++ ISP6 Vàng xám ng xanh oliu Vàng oliu ng nâu - + ISP7 Vàng ph t xanh ng Xanh oliu Vàng oliu ng nâu vàng ++ ISP8 Oliu ng Xám Vàng xám - ++ Ghi chú: Sinh tr ưng:“+” kém; “++” t t; “+++” r t t t;(-) không sinh s c t .
4. 330 P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 a b Hình 1. Khu n l c x khu n Hình 2. Cu ng sinh bào t (a) và bào t (b) c a x khu n n i sinh HNR3X4. HNR3X4 trên môi tr ưng ISP2. Quan sát d ưi kính hi n vi in t v i Gen 16S rDNA c a ch ng HNR3-4 (1358 phóng i 8000 l n cho th y b m t bào t c a bp), có t ươ ng ng cao (99%) vi các gen ch ng HNR3X4 d ng tr ơn nh n, chu i bào t tươ ng ng c a m t s x khu n thu c chi th ưng dài v i s l ưng bào t trên chu i t 10- Streptomyces (Hình 4): S. parvulus A10, S. 50, t m t cu ng sinh bào t có th m c ra 3 ÷ parvulus 2297 , Streptomyces sp PZP027 và S. 4 nhánh bào t có d ng xo n lò xo nh . luteogriseus S2-SC15. Nh ư v y, k t qu phân lo i 16S rDNA cho th y, ch ng x khu n 3.4. Phân tích trình t gen 16S rDNA HNR3X4 có c im r t g n g i và có tươ ng ng cao v i loài S. parvulus nên ch ng Sn ph m khu ch i t DNA t ng s c a này ưc t tên là S. parvulus NHR3X4. Theo ch ng HNR3X4 v i c p m i 27f và 14R cho công b c a Naine và c ng s (2015) x khu n mt b ng DNA duy nh t có kích th ưc kho ng S. parvulus là loài có kh n ng sinh ch t kháng 1400 bp (Hình 3). khu n c ch c vi khu n Gram (+) và Gram (-) ki m nh [13]. nh 3. in di s n ph m PCR Hình 4. Mc t ươ ng ng di truy n gi a ch ng S. parvulus NHR3X4 ca HNR3X4 trên gel agarose 1%. vi các loài x khu n có h hàng g n d a vào trình t nucleotide c a gen16S Rrna. M: Thang DNA chu n 300- 10.000bp; 1 và 2 là sn ph m PCR
5. P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 331 3.5. La ch n môi tr ng và iu ki n thích 1M, l c 150 vòng/phút trong 5 ngày. K t qu hp cho x khu n sinh ch t kháng khu n cho th y, ch ng HNR3X4 sinh ch t kháng sinh tt nh t trên môi tr ưng Gause I pH7. La ch n môi tr ng Trên môi tr ưng AH4 v i pH thích h p và Môi tr ưng là m t trong nh ng y u t quy t các iu ki n công ngh gi nguyên, ti n hành nh, nh h ưng quan tr ng n s sinh tr ưng, thay i nhi t nuôi và kh o sát kh n ng phát tri n và sinh ch t kháng sinh c a các sinh t ng h p ho t ch t kháng khu n nhi t ch ng x khu n. Trên c ơ s m t s môi tr ưng 25, 30 và 37 oC. Kt qu Hình 5 cho th y, ã ưc công b s d ng cho x khu n: SCA, ch ng HNR3X4 sinh tr ưng và sinh t ng h p o Gause I, ISP 4, AH 4, môi tr ưng khoáng có b ho t ch t kháng khu n cao nh t 37 C. sung 1% sodium propionate (KCT) nhi t pH và nhi t nuôi c y c a môi tr ưng là o 28 C và l c 150 vòng/phút. các y u t quan tr ng nh h ưng n s n xu t Kt qu th hi n B ng 3 cho th y, HNR3X4 ch t kháng sinh c a nhi u loài x khu n vì hai kháng n m cao nh t trên môi tr ưng Gause I và yu t này có liên quan n ho t tính c a m t cho sinh tr ưng t t nh t môi tr ưng AH 4. Môi s enzym quan tr ng xúc tác các ph n ng trao tr ưng Gause I ưc l a ch n làm môi tr ưng i ch t c a t bào và hình thành ch t kháng sinh ch t kháng sinh t t nh t cho HNR3X4. sinh [14]. Ch ng S. parvulus HNR3X4 trong nghiên c u này có pH và nhi t thích h p là nh h ng c a pH và nhi t 7,0 và 37 oC n m trong kho ng pH và nhi t thích h p cho sinh tr ưng và sinh t ng h p ch t X khu n HNR3X4 ưc nuôi môi tr ưng kháng sinh ưc công b t nhi u loài thích h p ưc iu ch nh pH dao ng t 6 ÷ Streptomyces sp. [15, 16]. 8, b ưc nh y 0,5 b ng NaOH 1M và H 2SO 4 B ng 3. L a ch n môi tr ưng thích h p cho sinh t ng h p ch t kháng khu n Môi tr ưng Vòng kháng khu n, D, mm Mt B. subtilis S. aureus (CFU/ml) 5 SCA 22,5 ± 0,71 21,5 ± 0,71 1,1.10 Gause 1 24,75 ± 0,35 23 ± 0,35 1,86.10 6 6 ISP4 21,5 ± 0,71 21,5 ± 0,71 1,14.10 6 AH 4 23,5 ± 0,71 21,25 ± 1,06 5,00.10 6 KCT 15 ± 1,41 12 ± 1,41 2,2.10 A B C Hình 5. nh h ưng c a pH (A), nhi t môi tr ưng (B, C) n sinh tr ưng và sinh ch t kháng khu n c a HNR3X4.
6. 332 P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 Trên môi tr ưng thích h p Gause I, ti n Li c m ơn hành lên men các iu ki n thích h p nh ư nhi t 37 oC và pH 7,0, sau 5 ngày nuôi c y, Nghiên c u này nh n ưc s h tr kính thu d ch chi t thô t d ch lên men c a ch ng S. phí t tài “Nghiên c u s a d ng c a x parvulus HNR3X4 b ng cách chi t trong dung khu n n i sinh trên cây có múi c s n mi n môi ethyl acetate ba l n v i t l (1:1) và ki m Bc Vi t Nam và ti m n ng sinh t ng h p các tra kh n ng kháng khu n và kháng n m. Kt ch t kháng khu n và kích thích t ng tr ưng qu cho th y, ho t ch t thu ưc v n th hi n th c v t c a chúng” Mã s tài: ho t tính kháng khu n m nh v i hai ch ng vi VAST. LT.12/15-16 và s d ng trang thi t b khu n Gram (+) ki m nh trên, v i vòng ca phòng Thí nghi m tr ng im công ngh kháng t trên 30 mm. Tuy nhiên vòng kháng gen, Vi n Công ngh sinh h c. nm nh n ưc gi m kích th ưc áng k t 15 mm v i n m F. oxysporum FO5 xu ng còn 5 mm. Ki m tra ho t tính phân h y chitin cho Tài li u tham kh o th y, ch ng HNR3X4 có kh n ng phân h y [1] M. Tharek, K. Dzulaikha, S. Salwani, H.G. Amir, chitin. Nh ư v y b ưc u có th k t lu n d ch N. Najimudin, Ascending endophytic migration of lên men do có c enzym phân h y chitin và ch t locally isolated diazotroph Enterobacter sp. Strain kháng khu n nên vòng kháng n m nh n ưc USML2 in rice, Biotechnology, 10 (2011) 521. ln h ơn so v i d ch chi t thô nh n ưc. Tuy [2] M.A. Abdalla, J.C. Matasyoh, Endophytes as nhiên, c n có các nghiên c u sâu h ơn n a Producers of Peptides: An Overview About the Recently Discovered Peptides from Endophytic làm rõ c u trúc c a ch t kháng khu n hay ch t Microbes, Nat. Prod. Bioprospect. 4 (2014) 257. kháng sinh mà chúng tôi nh n ưc t ch ng [3] N. Malfanova, B. Lugtenberg, G. Berg, Chapter 2 HNR3X4, iu này s m ra m t tri n v ng in “Molecular microbial ecology of the rhizosphere”, mi trong tìm ki m các ch t kháng sinh m i de Bruijn FJ (ed), Wiley-Blackwell (2013). trong t ươ ng lai. [4] F. Jariwala, R. Ranjan, Endophytic actinomycetes and their role protection, Atmiya Spandan , 1(1) (2013) 73. 4. Kt lu n [5] B. Joseph, P. Sankarganesh, B.T. Edwin, S.J. Raj, Endophytic Streptomycetes from Plants with 1. X khu n n i sinh HNR3X4 ưc phân Novel Green Chemistry: Review, International Journal of Biological Chemistry 6 (2012) 42. lp t r cây b ưi Di n Hà N i ưc xác nh [6] H. Nomomura, Key for classification and có kh n ng i kháng m nh v i vi khu n identification of 458 species of the Streptomyces Gram (+) Bacillus subtilis và Staphylococcus included in ISP , J. Ferment. Technol. 52(2) aureus . (1974) 78. 2. Ch ng HNR3X4 có kh n ng sinh t ng [7] W. Wilkins, Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 2, Vol. 3, Vol. 4. Publisher hp nhi u enzyme ngo i bào vì v y có kh Springer-Verlag, New York, 1989. nng phân h y các c ơ ch t nh ư: CMC, c ơ ch t [8] A. Shutsrirung, Y. Chromkaew, W. Pathom- tươ ng t lignin, tinh b t, chitin và xylan. Aree, S. Choonluchanon, N. Boonkerd, 3. Nghiên c u m t s c im sinh h c và Diversity of endophytic actinomycetes in mandarin grown in northern Thailand, their phân tích trình t gen 16S rDNA cho th y phytohormone production potential and plant ch ng HNR3X4 có c im g n g i v i growth promoting activity, Soil Science and ch ng S. parvulus và ưc t tên là S. parvulus Plant Nutrition 59 (3) (2013) 322. HNR3X4. X khu n nghiên c u có kh n ng [9] E.B. Shirling, D. Gottlieb, Cooperative sinh t ng h p ho t ch t kháng khu n trên môi description of type culture of Streptomyces tr ưng Gause I, pH =7 và nhi t 37 oC. species, Int. J. Sys. Bacteriol. 19(4) (1966) 391. [10] E.B. Shirling, D. Gottlieb, Methods for characterisation of Streptomyces species, Int. J. Sys. Bacteriol. 16(3) (1966) 313.
7. P.T.H. Th o và nnk. / Tp chí Khoa h c HQGHN: Các Khoa h c Trái t và Môi tr ng, T p 32, S 1S (2016) 327-333 333 [11] J. Sambrook, D.W. Russell, Molecular cloning. A [14] J. Liang, Z. Xu, T. Liu, J. Lin, P. Cen, Effects of laboratory manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor cultivation conditions on the production of Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, natamycin with Streptomyces gilvosporeus LK- 2001. 196, Enzyme Microb. Tech. 42 (2008) 145. [12] B. Intra, I. Mungsuntisuk, T. Nihira, Y. Igarashi, [15] L.S. Singh, S. Mazumder, T.C. Bora, W. Panbangred, Identification of actinomycetes Optimisation of process parameters for growth from plant rhizospheric soils with inhibitory and bioactive metabolite produced by salt- activity against Colletotrichum spp., the causative tolerant and alkaliphilic actinomycetes, agent of anthracnose disease, BMC Research Streptomyces tanashiensis strain A2D, J. Mycol. Notes 4 (2011) 98. Med. 19 (2009) 225. [13] J. Naine, C.S. Devi, V. Mohanasrinivasan, B. [16] M.V. Arasu, V. Duraipandiyan, P. Agastian, S. Vaishnavi, Antimicrobial, antioxidant and Ignacimuthu, In vitro antimicrobial activity of cytotoxic activity of marine Streptomyces Streptomyces spp. ERI-3 isolated from Western parvulus VITJS11 crude extract, S. Braz. Arch. Ghats rock soil (India), J. Med. Mycol. 19 (2009) 22. Biol. Technol. 58(2) (2015) 198. Endophytic Actinomyces Streptomyces parvilus HNR3X4 in Ha Noi -Dien Grapfruit Trees and the Potential to Biosynthetize Antimicrobial Substances Phan Thi Hong Thao 1, Nguyen Vu Mai Linh 1, Nguyen Thi Hong Lien 1, Nguyen Kieu Bang Tam 2, Nguyen Van Hieu 1 1Institute of Biotechnology, Vietnam Academy of Science and Technology (VAST), 18 Hoang Quoc Viet, Hanoi, Vietnam 2VNU University of Science, 334 Nguyen Trai, Hanoi, Vietnam Abstract: Endophytic streptomycetes colonize internal plant tissues, i.e., living under special microhabitat conditions. Endophytes were reported to have the potential to produce valuable biologically active compounds, especially antibacterial substances. Thus, endophytic streptomycetes are regarded as promising candidates for the quest of new substances for pharmaceutical and medical application. In this paper, 45 endophytic streptomycetes were isolated from Dien grapefruit trees, a specialty of Hanoi, to study their biological characteristics and antipathogen activity. Of them, the isolate HNR3X4 showed high antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, and pathogenic fungi such as Geotrichum candidum , Fusarium oxysporum and F. udum . This isolate could grow well on various media at a large pH range of 4 ÷ 9 and temperature range of 15 ÷ 45 oC. Its spiral spore-chains bore 10 to 50 smooth spores each. Phylogenetic analysis based on 16S rDNA gene sequences indicated that strain HNR3X4 belonged to the genus Streptomyces , and was most closely related to Streptomyces parvulus A10 (99.0 % sequence similarity). Therefore, the isolate was named S. parvulus HNR3X4. In the shake flask culture, high antimicrobial activity of S. parvulus HNR3X4 was achieved in a Gause’s medium I with the initial pH of 7.0 and temperature of 37 oC. Keywords: Endophytic streptomycetes, identification of bacteria, 16S rDNA, Streptomyces parvulus, antibacterial activity.